Первую выставку современного искусства галерея провела в 1986 году, и эта выставка стала прообразом современной биеннале. Отбор участников для первой выставки проводили непосредственно братья Челона, а ныне отбором участников занимается специальное международное жюри. Оно же определяет самых достойных, чтобы вручать премию биеннале «Лоренцо Великолепный», названную так в честь Лоренцо ди Пьеро де Медичи «Великолепного» – главы Флорентийской республики в эпоху Возрождения, покровителя наук и искусств во Флоренции.
Основная программа Флорентийской биеннале проходит в Spadolini Pavilion в Fortezza da Basso, кроме того, некоторые дополнительные мероприятия проводятся на других площадках. Обычно в биеннале участвуют художники из более чем 70 стран мира, представляя публике и высокому жюри работы в таких категориях, как живопись, скульптура, графика, фотография, инсталляции, цифровое искусство и смешанная техника.
Стоит отметить, что Флорентийская биеннале является участником программы «Диалог между цивилизациями», предложенной ООН для укрепления взаимопонимания и взаимного уважения с помощью взаимодействия между цивилизациями, а также обеспечения более высокой степени уважения культурного разнообразия и культурного наследия разных народов мира.